Diferentes mensajeros secundarios intracelulares son capaces de actuar como señales de activación para el factor de transcripción CREB.
Como consecuancia de esta activación se produce la fosforilación de CREB en el residuo de serina de la posición 133 (Ser-133).Por lo menos 4 tipos de kinasas han sido descritas como posibles activadoras del factor de transcripción CREB, entre ellas la kinasa dependiente de AMPc o las MAPKs.
Diferentes estudios indican que CREB está constitutivamente ligado a cromatina en ausencia de agonistas. CREB se encuentra unido habitualmente a CREs (elemento de respuesta a AMPc cerca de las cajas TATA). A pesar de esto, y como veremos a continuación, la distribución de de los motivos tomados como consenso de unión al DNA para CREB tienen una distribución muy amplia que no se restringe a las regiones promotoras de diferentes loci.
En este estudio se ha mapeado la distribución de las regiones de unión a CREB sobre el cromosoma 22 humano.
Para lograr dicho objetivo se produjo la immunoprecipitación de CREB unido a DNA y se aplicaron los resultados sobre un array con las secuencias completas (divididas en fragmentos de unas 800 pares de bases) del cromosoma 22 humano.
Para anazlizar la expresión diferncial de aquellos genes cuya transcripción estuviese presumiblemente ligada a CREB en el cromosoma 22, se seleccionó una líne;a celular JEG-3 capaz de aumentar sus niveles de AMPc intracelular en respuesta a forskolina.
Los resultados mostraron lo siguiente: Se identificaron 215 fragmentos obtenidos de la inmunoprecipitación con anti-CREB hibridando sobre el array del cromosoma humano 22. De los 215 sitios encontrados, el 60% (130) fragmentos se encontrban a menos de 10kb sobre alguno de los 936 loci del cromosoma.
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De los 85 fragmentos restantes a más de 10kb de alguno de los loci, 62 codificaban o estaban a menos de 10kb de una TAR (regiones transcripcionalmente activas). Por lo tanto, el 89% (130 mas 62) e los 215 sitios estaban a menos de 10kb o insertadas en una región de transcripción conocida del cromosoma 22. Podemos ver con más detalle esto en la"FIG.1".
De los 215 hits que fueron encontrados 6 se insertan en una secuencia exacta al lugar de unión consenso TGACGTCA, 65 se unían a la mitad de la secuncia consenso CGTCA, y finalmente cerca del 83% de los fragmentos se encontraban a menos de 500 pares de bases del motivo consenso,de la mitad del motivo consenso, o de otros motivos de gran similitud con el consenso como TGACGTMW y TGANNTCA, donde M es A o C, W es A o T, y N es cualquier base. |
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Con el objetivo de determinar cuáles eran los resultados en la expresión de los genes controlados por CREB1 (dependiente de AMPc) lo que hicieron fue identificar genes cuya expresión variaba en presencia de forskolina.
Un total de 99 genes del cromosoma 22 presentaban una alteración notable de sus niveles de expresión : 51 eran activados, 48 eran reprimidos y 16 eran pseudogenes( 2 activados y 14 reprimidos). Los autores de este artículo entiendo que en lo respectivo a los pseudogenes todos ellos son expresados o bien actúan como represores hibridando con transcritos funcionales.Por ultimo CREB1 tambien unía alrededor de 85 genes cuya transcrpción no se veía afectada por el tratamiento con forskolina.
Son ejemplos de genes cuya transcripción está activada por CREB1: la proteína de unión a calcineurina Cabin1, la adenylosuccinato liasa (ADSL),o la ceramida kinasa y son ejemplos de genes inhibidos por CREB1 la proteína fosfatas 1F (PPM1F)o un gen codificante para una subunidad del canal de calcio (CACNA11).
Teniendo en cuenta el conjunto de resultados obtenidos resulta bastante concluyente el papel regulador del factor de transcripción CREB, y esto de alguna manera viene a corroborar los resultados obtenidos en nuestro estudio realizado mediante la busqueda informática de patrones a los que supuestamente se uniría el factor CREB.